摘要

背景：當歸芍藥散是一種常用的中藥方劑，在治療阿爾茨海默病方面已顯示出臨床療效。本研究旨在探討DSS及其拆方（酸甘湯與辛甘湯）在治療AD中的療效差異，以及DSS恢復AD自噬的機制。

方法：采用網絡藥理學策略闡述DSS在AD中的生物活性成分、相關靶點及調控機制，包括靶點預測、PPI網絡構建與分析、GO和KEGG通路富集分析。采用腦室注射Aβ1-42誘導的AD小鼠模型，評估DSS及其拆方對AD的治療效果。采用Morris水迷宮評估認知功能。通過RT-qPCR和ELISA定量炎癥細胞因子表達水平。采用Western blot檢測AD病理標志物及AMPK/mTOR信號通路相關蛋白的表達。

結果：從數據庫和文獻中篩選出50個活性化合物和718個HUB基因。KEGG和GO分析表明，DSS抗AD的潛在機制涉及AMPK/mTOR信號通路和線粒體自噬。體內動物實驗結果表明，DSS、SG和XG治療改善了小鼠的認知功能并減輕了神經炎癥，緩解了神經元細胞的病理變化，提高了PSD-95蛋白水平，降低了APP和p-Tau水平。其中，DSS效果最佳。此外，DSS、SG和XG上調了LC3、Beclin1和p-AMPK的表達，同時降低了P62和p-mTOR的表達。

結論：DSS、SG和XG可能通過AMPK/mTOR自噬信號通路，改善了Aβ1-42注射小鼠的AD相關病理癥狀。
關鍵詞：阿爾茨海默病；當歸芍藥散；自噬；AMPK/mTOR

核心內容

本研究探討了經典中藥復方當歸芍藥散及其拆方（酸甘湯、辛甘湯）對阿爾茨海默病的治療作用及機制。核心發現如下：

療效驗證：在Aβ1-42誘導的AD小鼠模型中，DSS及其拆方均能顯著改善小鼠的空間學習記憶能力（Morris水迷宮測試），減輕神經炎癥（降低IL-1β、IL-6、TNF-α水平及小膠質細胞標記物IBA1表達），改善海馬神經元病理形態，上調突觸蛋白PSD-95表達，并降低AD關鍵病理蛋白APP和p-Tau的水平。其中，全方DSS的改善效果最為顯著。

作用機制：網絡藥理學分析預測DSS抗AD的潛在機制與AMPK/mTOR信號通路和自噬相關。實驗驗證表明，DSS及其拆方能上調自噬相關蛋白LC3-II和Beclin1的表達，下調自噬底物蛋白P62的表達，同時激活AMPK（增加p-AMPK）并抑制mTOR（減少p-mTOR），表明其能夠恢復由Aβ誘導的自噬抑制，這一過程可能通過調控AMPK/mTOR信號通路實現。

方劑配伍意義：研究對比了全方DSS與拆方SG、XG的效果，發現全方療效優于各拆方，體現了中藥復方多成分、多靶點協同作用的“配伍”優勢與理論精髓。

研究流程

網絡藥理學預測：

從TCMSP數據庫篩選DSS六味藥材的活性成分（OB≥30%，DL≥0.18），并補充文獻報道的有效成分，共得50個。

通過Swiss Target Prediction預測活性成分靶點。

從OMIM、GeneCards等疾病數據庫獲取AD相關靶點。

取藥物靶點與疾病靶點的交集，得到299個DSS治療AD的潛在關鍵靶點。

構建蛋白互作網絡，篩選出核心靶點。

對關鍵靶點進行GO功能和KEGG通路富集分析，提示AMPK/mTOR信號通路和自噬是重要通路。

分子對接顯示DSS主要活性成分（如芍藥苷、阿魏酸、白術內酯III等）與AMPK、mTOR蛋白具有良好的結合活性。

體內動物實驗驗證：

模型建立：對C57BL/6J小鼠進行雙側腦室注射聚集態Aβ1-42，建立AD模型。

分組給藥：分為假手術組、模型組、DSS組、酸甘湯組、辛甘湯組、陽性藥多奈哌齊組。灌胃給藥28天。

行為學評估：給藥后第21天開始進行Morris水迷宮測試，評估學習記憶能力。

樣本采集與分析：行為學測試后處死小鼠，取腦組織。

分子生物學：RT-qPCR和ELISA檢測炎癥因子（IL-1β, IL-6, TNF-α）的mRNA和蛋白水平；Western blot檢測PSD-95、APP、p-Tau以及自噬（LC3, P62, Beclin1）和AMPK/mTOR通路（p-AMPK, p-mTOR）相關蛋白。

組織形態學：HE染色觀察海馬CA1和DG區神經元形態；免疫組化檢測小膠質細胞標記物IBA1的表達。

總結與展望

總結：本研究綜合運用網絡藥理學和實驗驗證，證實了當歸芍藥散能有效改善AD模型小鼠的認知功能障礙、神經炎癥和神經元損傷，其神經保護作用可能與激活AMPK/mTOR信號通路、進而恢復細胞自噬功能有關。全方DSS的療效優于其拆方，體現了中藥復方整體治療的優勢。

展望與局限：

劑量關系：本研究未探討不同給藥劑量下的量效關系，未來可進一步細化。

機制深度驗證：目前的研究結果主要為相關性證據，未來需要利用基因敲除、特異性抑制劑等反向驗證手段，更直接地證實AMPK/mTOR自噬通路在DSS神經保護作用中的核心地位。

評估指標：對神經元和突觸恢復的評估指標（如PSD-95）較為有限，未來應納入更多元的突觸前/后蛋白、電生理等指標進行全面評估。

模型拓展：本研究僅使用了Aβ腦室注射模型。為了增強結論的普適性，未來應在APP/PS1等轉基因AD模型中進行驗證。

成分與靶點：雖然網絡分析篩選了成分和靶點，但具體是哪些成分通過哪些關鍵靶點驅動了核心通路，仍需進一步的細胞和分子實驗深入解析。

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IF3.3

文章標題

Danggui Shaoyao San and disassembled prescription: neuroprotective effects via AMPK/mTOR-mediated autophagy in mice

作者：

Xiaoqing Cheng, Yuqiong Dai, Baoling Shang, Shuting Zhang, Liting Lin, Qingguang Wu, Ruoting Zhan, Shengqing Li, Sijun Liu

DOI：

10.1186/s12906-024-04588-x；

發表期刊：

BMC Complementary Medicine and Therapies

引用優品生物產品

1.SYP-M0026Mouse IL-1β ELISA kit

2.SYP-M0031Mouse IL-6 ELISA kit

3.SYP-M0036Mouse TNF-α ELISA kit